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Lorsque les cellules de la peau des patients du syndrome de Marfan ont 茅t茅 cultiv茅es en laboratoire, 90% ont montr茅 un d茅ficit de fibrilline, les chercheurs ont dit. Une telle carence peut entra卯ner un cadre de tissu conjonctif insuffisante, ce qui ? son tour repr茅sente les sympt?mes caract茅ristiques de la maladie, Hollister a dit, mais il a mis en garde qu'un tel lien n'a pas encore 茅t茅 d茅montr茅 de fa莽on concluante.
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dosage de la plasmine. Le dosage de la plasmine a 茅t茅 r茅alis茅e exactement comme d茅crit par Khalil et al. (27). En bref, la plasmine a 茅t茅 quantifi茅e en mesurant l'augmentation de l'absorbance ? 405 en raison de clivage de la plasmine substrat chromog猫ne sp茅cifique N p tosyle gly lys pro p nitroanilide (Sigma Chemical Co.). L'analyse de tous les 茅chantillons exp茅rimentaux et courbe standard ont 茅t茅 r茅alis茅es dans 96 puits plats plaques de microtitration ? fond (Falcon) en utilisant un lecteur de microplaques Thermomax (Molecular Devices Corp, Sunnyvale, CA). La courbe standard a 茅t茅 effectu茅e par incubation de 2 mM de N p tosyle gly lys pro p nitroanilide en pr茅sence d'une gamme de concentrations de la plasmine (Sigma Chemical Co.) de 1 ? 10 4 U / ml ? 1 10 2 U / ml. Pour mesurer la plasmine g茅n茅r茅e par les fibroblastes de la peau, soit 100 de milieu conditionn茅 de fibroblastes ou de milieu t茅moin ont 茅t茅 incub茅es avec 100 de substrat de la plasmine. Les milieux t茅moins 茅taient les suivants: 1) DMEM seul, 2) du DMEM + 10% de FCS, ou 3) du DMEM + 10% de Ultroser G cultiv茅es 20 h en l'absence de fibroblastes. Tous les 茅chantillons ont 茅t茅 test茅s en triple. Les 茅chantillons ont 茅t茅 incub茅s pendant 5 h ? 37 absorbance a 茅t茅 mesur茅e, et l'absorbance d'arri猫re-plan ? partir du milieu de commande a 茅t茅 soustraite de tous les 茅chantillons exp茅rimentaux et les courbes standards. La quantit茅 d'activit茅 de la plasmine pr茅sente a ensuite 茅t茅 d茅riv茅e ? partir des valeurs obtenues dans la courbe d'茅talonnage et pr茅sent茅es sous forme d'unit茅s d'activit茅 de la plasmine par 106 fibroblastes.
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